鸭禽流感病毒(AIV)ELISA检测试剂盒
鸭禽流感病毒(AIV)ELISA检测试剂盒
产品价格:¥1600(人民币)
  • 规格:96T
  • 发货地:浦东新区
  • 品牌:
  • 最小起订量:1盒
  • 免费会员
    会员级别:试用会员
    认证类型:企业认证
    企业证件:通过认证

    商铺名称:上海蒂莎科技有限公司

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    商品详情

      本试剂盒用于体外定性检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本鸭禽流感病毒(AIV)。

      有效期:6个月

      保存条件:2-8℃

      本试剂盒仅供科研使用,不得用于临床诊断

      实验原理:本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被鸭禽流感病毒(AIV)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、阴性和阳性对照、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鸭禽流感病毒(AIV)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),判定阴阳性。

      样本处理及要求

      1. 血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20-80℃保存,但应避免反复冻融。
      2. 血浆EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20-80℃保存,但应避免反复冻融。
      3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

      4. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

      注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

      需要而未提供的试剂和器材

      1. 酶标仪(450nm

      2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

      3.  37℃恒温箱

      4. 蒸馏水或去离子水

      试剂盒组成

      名称

      96孔配置

      48孔配置

      备注

      微孔酶标板

      96

      48

      阴性对照

      0.3mL

      0.3mL

      阳性对照

      0.3mL

      0.3mL

      样本稀释液

      6mL

      3mL

      检测抗体-HRP

      10mL

      5mL

      20×洗涤缓冲液

      25mL

      15mL

      按说明书进行稀释

      底物A

      6mL

      3mL

      底物B

      6mL

      3mL

      终止液

      6mL

      3mL

      封板膜

      2

      2

      说明书

      1

      1

      自封袋

      1

      1


      注意事项

      1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

      2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

      3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

      4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

      5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

      6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

      7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

      8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

      9. 不能使用过期产品。

      10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置

      试剂准备

      试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

      20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即120×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

      操作步骤

      1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃

      2. 设置阴性对照、阳性对照孔和样本孔,阴性、阳新对照孔各加50μL对照品

      3. 样本孔待测样本50μL;空白孔不加。

      4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min

      5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

      6. 每孔加入底物AB50μL37℃避光孵育15min

      7. 每孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

      实验结果计算

      1. 阴性对照OD值:小于0.2

      2. 阳性对照OD值:大于0.8

      3. 阳性判断(Cut-Off值):阴性对照OD+0.15,样本OD值大于阈值,判定为阳性,反之,为阴性。

    在线询盘/留言
  • 0571-87774297